Facemu ancu esperimenti di PCR, perchè i risultati sò sempre assai peggiu chè l'altri?
In u laboratoriu, fighjate à a PCR di l'altri, l'efficienza di l'amplificazione hè alta, a striscia di l'elettroforesi perfetta, è fighjate à a so propria, dura à fà per un bellu pezzu, sente a reazione hè assai bona, u risultatu di una prova falsa positiva ... u prublema?
Credu chì parechji di i nostri partenarii anu ancu scontru diversi prublemi.Quandu avemu in un muru in esperimenti di PCR, analizzeremu inconscientemente i fatturi in u sistema di reazione, ma spessu ignurà l'influenza impurtante di i consumabili in l'esperimenti.
U vostru risultatu PCR hè sbagliatu, i consumabili PCR pò esse u mutivu essenziale.Da una banda, a micro contaminazione di i consumabili o l'intruduzioni di inhibitori pruvucarà a contaminazione sperimentale;Per d 'altra banda, a selezzione impropria di consumables farà ancu soffrenu i risultati sperimentali.
U prublema vene di novu.Ci sò parechji tippi di consumabili PCR, cusì cumu sceglie i ghjusti per fà l'esperimentu più liscia?Chì sò i prublemi per esse attenti ?Ùn vi preoccupate, oghjeI cumminatu cù parechji anni di spirienza, risolviri i prublemi cumuni di selezzione di consumables PCR, spergu à aiutà vi.
Q1: Perchè i consumabili PCR sò generalmente fatti di materiale PP?
Huida: Perchè i provvisti di PCR sò generalmente in cuntattu direttu cù reagenti o campioni, i materiali di polipropilene (PP) sò biologicamente inerti, ùn aderiscenu micca à i biomoleculari, è anu una bona toleranza chimica è tolleranza di temperatura (pò esse autoclapped à 121).° C, pò ancu sustene i cambiamenti di temperatura durante u ciclu termale).
Q2: Cumu deve sceglie trà e diverse dimensioni di tubi / piastre PCR?
HUIDA: Scopu di a selezzione: selezziunà i prudutti giusti secondu e esigenze sperimentali specifiche.A maiò parte di a dimensione di u tubu PCR pò risponde à i requisiti di a reazione PCR.Nant'à sta basa, hè cunsigliatu di sceglie u tubu bassu voluminu prima.Perchè u tubu / piastra di reazzione di pocu voluminu hà un picculu spaziu sopra, a conduttività di u calore hè migliurata è l'evaporazione hè ridutta.À u listessu tempu, hè necessariu di evitari di aghjunghje troppu o troppu pocu mostri.Troppu pò purtà à una diminuzione di a conductività termale, u spillage è a contaminazione incruciata, mentre chì troppu pocu pò esse risultatu in a perdita di l'evaporazione di mostra.
Specificazioni è volumi di tubi di reazione cumuni:
Tubu unicu / cumminatu: 0.5ml, 0.2ml, 0.15ml
Piastra da 96 pozzi: 0,2 ml, 0,15 ml
Piastra da 384 pozzi: 0,04 ml
Q3: Quandu a quantità di mostra hè chjuca, sceglieraghju un tubu unicu o un tubu cumminatu, ma perchè alcuni anu una coperta piatta è alcune anu una copertura cunvexa?
Huida: Quandu a quantità di mostra hè chjuca, u tubu unicu o u tubu cumminatu serà preferitu.In ogni casu, quandu u voluminu di reazzione hè grande, u tubu unicu hè dominante, è u voluminu pò ghjunghje à 0,5 mL.E cuperta piatta è coperta cunvessu ognunu hà u vantaghju, specifichi ponu riferite à l'infurmazioni seguenti.
Tubu unicu: 0,2 ml è 0,5 ml;Pudete sceglie a quantità di mostra in modu flessibile.
Tubu di cunnessione: 0.2ml o 0.15ml hè opzionale;8 o 12 tubi sò cumuni.
Copertura piatta: pò furnisce una trasmissione precisa di signali di fluorescenza per qPCR;Facile à scrive marchi.
Copertura cunvexa: cuntattu cù a tappa calda di l'instrumentu PCR per riduce a deformazione di u tubu di reazzione causata da a pressione;Tuttavia, affettarà a trasmissione di u signale di fluoriscenza è ùn pò micca esse appiicata à l'esperimentu qPCR.
Q4: Perchè alcuni platti PCR anu falde è alcuni ùn anu micca?
Huida: In fattu, a falda di a piastra PCR hè pensata per adattà megliu à l'applicazioni d'automatizazione, furnisce un supportu stabile è resistenza meccanica per l'instrumentu, è ancu una stabilità più altu durante u prucessu di pipetting.
I platti PCR sò generalmente divisi in non-hemline, half-hemline è full-hemline.
SenzaPiastra: Adatta per a maiò parte di e macchine PCR o macchine qPCR, ma micca per l'applicazioni d'automatizazione.L'stabilità ùn hè micca alta in u prucessu di pipetting, perchè deve esse usatu cù supportu di piastra.
Piastra di bordu di mezza falda: pò esse adattata à l'applicazione di l'etichetta o di u codice à barre, è l'applicazione automatica, è hà una bona stabilità di pipetta.
Piastra di bordu di gonna piena: assai adattatu per applicazioni sperimentali automatizati, pò ancu esse adattatu à l'etichetta è l'applicazione di codice à barre.Hà una bona forza meccanica, pò esse usata in l'instrumentu PCR di u modulu bulge, è hà una alta stabilità in u prucessu di pipetting.
Q5 :Per i platti PCR, perchè i cantoni è l'etichette ùn sò micca uguali?
Huida: Depende di l'effettu di u tagliu di u cantonu è a marcatura.
Corner cutting: L'scelta di a pusizione di tagliu di l'angulu di a piastra PCR dipende da e esigenze di u strumentu adattatu per un posizionamentu faciule.
Identificazione: I marcatori alfanumerichi nantu à i platti PCR aiutanu à identificà i pozzi individuali è i lochi di mostra.In generale per u logu digitale di culore in rilievu o logu incisu.Per alcune applicazioni automatizate, i piatti di reazione stampati è marcati sò megliu sigillati.
Q6: Perchè alcuni platti PCR sò cunvessi mentre chì altri sò piani?Quale hè megliu?
Huida: Ciò chì si adatta hè megliu.Ci hè dui tipi di placche PCR cumuni: margine di poru pianu è margine di poru altu.
Piastra di reazione di margine di foru pianu, adattatu per a maiò parte di l'apparecchi PCR.
I platti di reazione cù bordi di orifiziu crescente facilitanu a sigillatura di a membrana è riducenu u risicu di contaminazione incruciata trà i campioni.
Tempu di posta: 03-03-2021